微生物菌种

微生物菌种是生物技术的基础和重要资源，在医学、农业、工业、环境和科学研究等领域有着广泛应用和价值。

为了保证菌种质量和安全，满足不同的使用需求，需对菌种进行有效的保藏和管理。

菌种保藏

菌种保藏是指将微生物菌种在一定条件下保存，使其保持活力和稳定性，不受外界影响，方便日后使用和传递。

保藏技术的好坏直接影响到菌种的价值，是菌种研究和应用的关键技术之一。

定期移植保藏法

短期保藏法，原理是将菌种在液体或琼脂培养基中进行周期性的移植和培养，保持菌种的活力和纯度。

步骤：

1、选择合适的菌种和培养基，进行预培养和增殖；

2、将菌种接种到液体或琼脂培养基中，4℃～8℃保存；

3、每隔一定的时间（一般为1～4周），将菌种从冰箱中取出，进行移植和培养，然后再放回冰箱保存；

4、在每次移植前后，进行菌种检测和记录，确认菌种活力、纯度、稳定性和遗传特性。

液体石蜡保藏法

短期保藏法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入液体石蜡，形成一层油膜，隔绝空气和水分，保持菌种活力和纯度。

步骤：

1、菌种预培养和增殖；

2、接种到液体培养基，培养至适当的生长阶段；

3、在培养管口部加入液体石蜡，形成油膜，覆盖菌液，封闭培养管；

4、4℃～8℃冰箱保存；

5、使用时，用无菌针头穿过油膜，取出菌液。

沙土管保藏法

中期保藏方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入含有沙土的玻璃管中，使菌种附着在沙土颗粒上，然后冷冻保存，保持菌种活力和纯度。

步骤：

1、菌种预培养和增殖；

2、接种到液体培养基，培养至适当的生长阶段；

3、在无菌条件下，用火焰灼烧含有沙土的玻璃管，干燥和灭菌；

4、用无菌针头或吸管，菌液滴加到沙土管，使菌液均匀分布，每管约加0.5～1ml的菌液；

5、沙土管放入-20℃～-80℃冷冻箱中保存；

6、使用时，用无菌针头或吸管，从沙土管中取出少量的沙土，加入液体培养基中，进行恢复和培养。

低温冷冻保藏法

中期保藏方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入适量的冷冻保护剂，如蔗糖、甘油、牛血清等，然后快速冷冻至-20℃～-80℃，保持菌种活力和纯度。

步骤：

1、菌种的预培养和增殖；

2、接种到液体培养基，培养至适当的生长阶段；

3、在无菌条件下，将菌液与冷冻保护剂按一定的比例混合，制成冷冻液，每管约装1～2ml的冷冻液；

4、将冷冻液装入无菌的塑料管或玻璃管中，封闭好管口，贴上标签；

5、将冷冻管放入-20℃～-80℃的冷冻箱中保存；

6、使用时，取出冷冻管，37℃水浴中解冻，然后将冷冻液加入液体培养基中，进行恢复和培养。

冷冻干燥保藏法

中期保藏方法，原理是将菌种在液体培养基中培养后，加入适量的冻干保护剂，如蔗糖、牛血清、明胶等，然后在真空条件下进行冷冻干燥，使菌种的水分被亚冰升华，形成干燥的菌粉，保持菌种的活力和纯度。

步骤：

1、菌种预培养和增殖；

2、接种到液体培养基，培养至适当的生长阶段；

3、在无菌条件下，将菌液与冻干保护剂按一定的比例混合，制成冻干液，每管约装1～2ml的冻干液；

4、冻干液装入无菌玻璃管，封闭管口，贴上标签；

5、将冻干管放入干燥机进行冷冻干燥，直到形成干燥的菌粉；

6、取出冻干管，放入密封容器，干燥、避光、常温环境保存；

7、使用时，取出冻干管，溶解菌粉，将冻干液加入液体培养基中培养。

总结

保藏微生物菌种的目的是为了保证菌种的质量和安全，以及满足不同的使用需求。保藏技术的选择和实施需要根据菌种的类型、特性、用途和期限等因素进行。