在科研领域，准确检测大鼠胆囊收缩素（CCk）的浓度对于深入了解相关生理和病理过程至关重要。大鼠胆囊收缩素（CCk）试剂盒（ELISA）为这一检测需求提供了可靠的工具。下面将对该试剂盒的使用方法、性能指标等方面进行详细介绍。

一、基本信息

该试剂盒货号为 RX301963R，规格有 48T 和 96T 两种。它用于定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中大鼠胆囊收缩素（CCk）的浓度，检测范围为 7.5 - 240 pg/mL。其特异性表现为与结构类似物无交叉反应，灵敏度小于 1 pg/mL，板内变异系数均小于 10%，板间变异系数均小于 15%。试剂盒需在 2 - 8℃保存，有效期为 6 个月。

二、实验原理

试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗大鼠胆囊收缩素（CCk）抗体的微孔酶标板中，加入校准品和待测样本，再加入 HRP 标记的抗大鼠胆囊收缩素（CCk）抗体。经过温育与洗涤，形成固相抗体 - 抗原 - 酶标抗体的夹心复合物。加入底物 A 和 B 后，在 HRP 催化下产生蓝色产物，加入终止液（2M 硫酸）后变为黄色。通过酶标仪在 450nm 波长上测定吸光度（OD 值），OD 值与待测样品中大鼠胆囊收缩素（CCk）的浓度正相关，进而拟合校准品曲线计算出样本浓度。

三、试剂盒使用限制

1. 仅供科研使用，严禁用于临床诊断。
2. 需在有效期内使用，过期产品禁止使用。
3. 不得与其他厂家的试剂盒或组分混用，应使用配套的样品稀释液。
4. 若样本值高于最高标准品浓度值，需适当稀释样本后重新测定。
5. 检测前需排除待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体干扰。
6. 本试剂盒测定结果与其他方法得到的结果不具有直接可比性。

四、技术提示

1. 混合蛋白溶液时要避免起泡。
2. 加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分应悬臂加样，防止交叉污染。
3. 保证合适的温育时间和充分的洗涤步骤，以确保实验结果的准确性。
4. 使用自动洗板机时，加入 30 秒浸泡步骤可提高检测精度。
5. 若底物溶液在保存过程中变为蓝色，表明已失效，不可使用。
6. 终止液加样顺序与底物溶液一致，加入后蓝色底物产物会瞬间变为黄色。
7. 实验用剩的板条应立即放回自封袋中，密封并低温干燥保存。
8. 所有液体组分使用前需充分摇匀，严格按照说明书的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

五、仪器与用品准备

实验需自备酶标仪（450nm）、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、洗瓶或自动洗板机、37℃水浴锅或恒温箱以及 500ml 量筒。

六、试剂盒组分与保存

试剂盒各组分有不同的储存要求和保质期。校准品、包被微孔板等开封后也需在特定条件下保存一定时间。校准品浓度依次为 240、120、60、30、15、7.5 pg/mL。

七、生物安全注意事项

1. 检测需符合实验室管理规范，防止交叉污染，所有样品、洗弃液和废弃物都应按传染物处置。
2. 试剂盒液体组分含 proclin - 300 防腐剂，可能引起皮肤过敏，避免吸入烟雾，防止与皮肤接触。
3. 底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激，操作时需注意防护，戴上防护手套，实验后彻底洗手。

八、样品采集与储存

不同类型的样品采集和储存方法各异，但都需注意避免使用叠氮钠作为防腐剂，且样本收集后若无法一次检测完毕，应按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时室温解冻并确保样品均匀充分解冻。

九、试剂准备

1. 使用前，样本和试剂盒所有组分都要至少复温 120min，确保充分复温到室温。
2. 浓缩洗涤液有结晶属正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后，按 1 : 20 与蒸馏水稀释。
3. 底物液 A 和 B 使用前按 1 : 1 体积充分混合，混合后 15 分钟内使用。

十、操作程序

1. 配制好试剂盒各种组分的工作液。
2. 取出所需板条，剩余板条密封放回冰箱。
3. 设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，加入相应液体。
4. 除空白孔外，加入 HRP 标记的检测抗体，封板后 37℃避光孵育 60min。
5. 洗板后加入混合好的底物液，再次封板 37℃避光孵育 15min。
6. 加入终止液后，在酶标仪 450nm 波长上读取各孔 OD 值。

十一、结果计算

以标准品浓度为横坐标，对应的 OD 值为纵坐标，采用四参数 Logistic 曲线拟合创建标准曲线方程，通过样本的 OD 值计算样品浓度。若样品被稀释，需乘以稀释倍数得到最终浓度。

十二、试剂盒性能指标

1. 物理性能：各液体组分应澄清透明、无沉淀或絮状物，微孔板铝箔袋应真空包装且无破损漏气。
2. 剂量反应曲线线性：校准品剂量反应曲线相关系数 r 值大于等于 0.9900。
3. 精密度：批内和批间精密度通过对高、中、低浓度样品多次检测评估，变异系数在一定范围内。
4. 灵敏度：最低检出剂量小于 0.1 pg/mL。
5. 回收率：在不同样本中添加目的蛋白样品进行回收率评估，回收率在 85% - 115% 之间。
6. 特异性：能识别天然和重组大鼠胆囊收缩素（CCk），与结构类似物无交叉。
7. 稀释线性：对添加高浓度 CCk 的样本进行不同倍数稀释，回收实验结果表明具有一定的线性关系。

十三、说明与警告

1. 由于技术限制，产品可能存在质量技术风险。
2. 实验结果受多种因素影响，需准备充足标本备份。
3. 不同批次产品可能有差别，电子版说明书仅供参考。
4. 试剂盒配套试剂必须配套使用，严格遵守实验说明才能得到最佳结果。
5. 试剂盒通常不建议用于检测其他公司重组蛋白。
6. 试剂盒仅供研究使用，用于其他用途公司不承担责任。
7. 终止液为稀硫酸，具有轻微腐蚀性，使用时需避免接触皮肤等部位。